Schwärmagar

1. Herstellung der Schwärmagarplatten
Die Röhrchen mit dem Schwärmagar (10 ml) sind vor der Verwendung zu verflüssigen, z. B. in einem Topf mit kochendem Wasser (etwa 10 min). Danach wird er auf ca. 40...45 °C abgekühlt und der Inhalt eines Röhrchens in eine sterile Petrischale mit einem Durchmesser von 6 cm gegossen. Die Agarplatten können bis zu 14 Tagen bei 2...8 °C gelagert werden (vor Austrocknung schützen).

2. H-Antigenbestimmung
Unter aseptischen Bedingungen wird die Agaroberfläche mit ca. 100 μl sterilem Aqua dest. benetzt. Von dem Salmonella-Stamm wird etwas Koloniematerial entnommen und punktförmig in der Mitte der Platte aufgetragen. Die Platte wird mit der Agarschicht nach unten 16-20 h bei 35...37 °C inkubiert. Zur Objektträgeragglutination wird das Material vom Rand der Platte entnommen.

3. Phaseninduktion
Bei diphasischen Stämmen, bei denen nur eine H-Phase nachweisbar ist, muss zur Ausbildung der zweiten Phase ein Phaseninduktionsverfahren durchgeführt werden.

3.1. Schwärm-Hemmverfahren nach Sven Gard (klassische Methode)
100 μl Testreagenz Anti-Salmonella H werden mit 10 ml verflüssigtem, auf 40...45 °C abgekühltem Schwärmagar in einer sterilen Petrischale von 6 cm Durchmesser gemischt. Nach dem Erstarren des Agars wird die Platte wie unter 2. angegeben mit Aqua dest. benetzt, mit dem Salmonella-Stamm beimpft, inkubiert und die Objektträgeragglutination durchgeführt. Gelingt die Phaseninduktion nicht, ist das Hemmverfahren zu wiederholen.

3.2. Vereinfachtes Verfahren
Neben der klassischen Methode kann auch das nachfolgende alternative Verfahren durchgeführt werden: Auf die Oberfläche der Schwärmagarplatte werden 100 μl Testreagenz Anti-Salmonella H getropft und mit einem sterilen Spatel verteilt. Danach wird die Mitte der Platte beimpft und wie o.a. inkubiert.
Nach 16-20 Stunden kann von dem geschwärmten Stamm die Identifikation der zweiten, nicht gehemmten H-Phase vorgenommen werden. Das vereinfachte Verfahren ermöglicht bei Verwendung der monoklonalen Testreagenzien den Nachweis der zweiten Phase in der Regel beim ersten Versuch.

Interpretation der Analysenergebnisse
Auf dem Schwärmagar wachsen die fast ausnahmslos begeißelten Salmonellen nicht in Kolonieform, sondern breiten sich von der Impfstelle schwärmend bis zur Plattenperipherie aus. Ist der Stamm nicht ausreichend geschwärmt, sollte der Test wiederholt werden.